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平行反應監測技術(PRM) 實驗服務

平行反應監測技術(PRM) 實驗服務

產品型號:

所屬分類:蛋白質組學實驗

產品時間:2024-08-18

簡要描述:提供商: 上海研謹生物
服務名稱: 平行反應監測技術(PRM) 實驗服務
服務: 1-2周
規格: 實驗服務
價格: 500元
歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!

詳細說明:

 

平行反應監測技術(PRM) :

PRM是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監視技術,能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白質/肽段進行定量。PRM技術基于Q-Orbitrap為代表的高分辨、高精度質譜平臺,首先

利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collision cell中對母離子進行碎裂,后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。

實驗意義:

PRM技術是針對無抗體蛋白的驗證新技術,用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相對定量蛋白質組數據的驗證,或對復雜樣本中的目標蛋白質進行靶向定量分析。

實驗步驟:

用PRM進行蛋白質組數據驗證的一般步驟為:

 

結果展示

 

實驗完成周期及交付標準:

1.實驗周期: --般PRM時間為: 5-10天

2.交付標準:

組學驗證:

①主要儀器、試劑和實驗方法。

②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。

③方法學重復性評價:三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) 。

④實驗結果:二級圖譜,XIC圖譜,原始峰面積強度值,矯正后的相對表達量,兩組樣本間的相對比值,ttest p值。

相對/定量:

①主要儀器、試劑和實驗方法。

②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。

③方法學評價:相對定量的重復性評價-測試樣本的三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) ;

定量的方法學評價-標準品XIC圖譜,LOD, LOQ,線性范圍, 6個稀釋梯度得到的標準曲線及線性公式(每個稀釋度有3次技術重復)。

④實驗結果:

相對定量:二級圖譜,XIC圖譜,原始峰面積強度值,矯正后的相對表達量,兩組樣本間的相對比值,ttest p值。

定量:二級圖譜,XIC圖譜,原始峰面積強度值,根據標準曲線計算得到的蛋白質濃度值,兩組樣本間的相對比值,ttest p值。

需確認的信息:

1.樣品:

①如果樣品為蛋白質溶液,蛋白質總量≥300mg;

②如果是組織樣品,樣品總量≥0.1g;如果是細胞樣品,細胞數量≥107個;

③如果是體液樣品,血清≥200ml,腦脊液≥200ml, 尿液≥1ml,淚液≥1ml。

2.樣品采集過程中使用到塑料制品時,盡量使用無色產品,以減少塑料制品中雜質對質譜檢測的影響。

文獻參考

[1] Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and HighMass Accuracy Mass Spectrometry. IntJ Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566- -28581.

 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗



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